الفهرس 
Chapter 1 introduction &aims of the studyOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 141 |  |  |
| | | from | 141 | | |
Abstract
يعتبر سرطان الثدي أحد أكثر أنواع السرطان شيوعًا بين الإناث في جميع أنحاء العالم، والذي يتميز بارتفاع معدل الوفيات. يمكن علاج مرض سرطان الثدي في معظم الحالات في المراحل المبكرة عن طريق العلاج الهرموني والعلاج الكيميائي والعلاج الإشعاعي. مع ذلك، وبسبب التوصيف الورمي غير المتجانس في معظم الحالات، يمكن أن يكون تحدث انتكاسة وغزو من جديد. تم تسجيل أكثر من نوع مختلف من سرطان الثدي بناءً على الخصائص النسيجية والجزيئية، ويعد سرطان الثدي الثلاثي السلبي أحد الأنواع الأكثر خطورة وعدوانية، والذي يتميز بافتقاره للمستقبلات الهرمونية مثل مستقبلات البروجسترون و مستقبلات الإستروجين ومستقبلات عامل نمو البشرة البشري ٢، وبالتالي لا تحدث استجابة للعلاج الهرموني. في هذا الصدد، توجد حاجة إلى تطوير علاجات بديلة للتغلب على انتشار خلايا سرطان الثدي المقاومة للأدوية. يتم تصنيف عقارات البورتيزوميب والريلوزول ضمن العلاجات الموجهة. البورتيزوميب هو دواء معتمد من قبل إدارة الغذاء والدواء، ويعمل كمثبط بروتيزومي حيث يستخدم في علاج الورم النِّقوي المتعدد. يعمل البورتيزوميب على تثبيط مسار إشاراتNF-κB، حيث يقوم بتثبيط تكسير البروتيزوم للجزيئات المثبطة لسلسلة كابا IκB عن طريق تثبيط البروتيزوم26S. من ناحية أخرى، الريلوزول هو عقار يستخدم لعلاج التصلب الجانبي الضموري عن طريق عدة آليات تتضمن تثبيط إفراز الغلوتامات. يقوم الريلوزول بتثبيط مستقبلSLC7AII، الذي يقلل من تدفق الغلوتامات، مما يؤدي إلى تثبيط إشارات mGluR1. بناءًا على الأدلة السابقة، يُمكن أن يكون الاستهداف المشترك لـ NF-κB وmGluR1 نهجًا علاجيًا محتملاً لمرض سرطان الثدي. تهدف هذه الدراسة إلى تحديد تأثير البورتيزوميب و الريلوزول إما بمفردهما أو معًا، على التكاثر ومستوى الالتهاب والإجهاد التأكسدي وعملية موت الخلايا المبرمج وانتشار الخلايا والتجذع لخلايا سرطان الثدي، باستخدام نموذج مختبري لخط خلايا سرطان الثدي الغدي النقيلي البشري MDA-MB- 231. تم تقسيم خلايا MDA-MB-231 إلى أربع مجموعات على النحو التالي : المجموعة الأولى : (المجموعة الضابطة) خلايا MDA-MB- 231 بدون علاج. المجموعة الثانية : خلايا MDA-MB- 231 معالجة بالبورتيزوميب. المجموعة الثالثة : خلايا MDA-MB- 231 معالجة بالريلوزول. المجموعة الرابعة : خلايا MDA-MB- 231 معالجة بخليط البورتيزوميب والريلوزول. تم تقييم التأثير السام والمضاد لتكاثر الخلايا لكل من البورتيزوميب والريلوزول على خلايا MDA-MB-231 باستخدام اختبارMTT، متبوعًا بحساب تركيز المادة الموافق للتثبيط النصفي IC50 باستخدام النتائج السابقة لكل من البورتيزوميب والريلوزول، وتم تحديد القيمة على أنها 60.07 nM للبورتيزوميب و64464 nM للريلوزول. بعد ذلك، تم قياس الجرعة التآزرية لمجموعة خليط البورتيزوميب والريلوزول بواسطة نموذج Chou-Talalay (CompuSyn Software). وأظهرت النتائج ارتفاع ملحوظ في التأثير المثبط للبورتيزوميب والريلوزول على تكاثر خلايا MDA-MB- 231 بنمط يعتمد على الجرعة. بالإضافة لذلك، أظهر فحص تكوين المستعمرات حدوث انخفاض كبير في نمو وبقاء خلايا MDA-MB- 231 في كل المجموعات المعالجة مع ملاحظة وجود تأثير أكبر في مجموعات البورتيزوميب وخليط البورتيزوميب والريلوزول. وفقاً للدراسات السابقة والنتائج التي توصلنا إليها، من المحتمل وجود تواصل متبادل بين جزيء NF-κB ومستقبل mGluR1. حيث تحفز إشارات mGluR1 و Rho GTPase تحويل الجلوتامين إلى غلوتامات، مما يحفز GLS1/2 في نمط يعتمد على.NF-κB علاوة على ذلك، بعض الدراسات تشير إلى أن إشارات مستقبل mGluR1 تقوم بتحفيز جزيء NF-κB، لكن الآلية غير معروفة حتى الآن. تقوم عقارات البورتيزوميب والريلوزول بتحفيز عملية الموت المبرمج من خلال زيادة مركبات الأكسجين التفاعلية والتي تزيد نسبة الإجهاد التأكسدي داخل الخلايا مما يُسبب تكسّر في الحمض النووي وتثبيط دورة الخلية وتحفيز الموت المبرمج للخلايا. تم استخدام فحص لطخة ويسترن western blot analysis لتقييم مستوى التعبيرعن بروتينات NF-κB وmGluR1، وهما هدفان للبورتيزوميب والريلوزول، على التوالي. يعمل البورتيزوميب على تثبيط بروتيزوم 26S مما يؤدي إلى ارتفاع نسبة جزيئات BAX المحفزة لعملية موت الخلايا المبرمج. بالإضافة لذلك، يقوم البورتيزوميب بقمع فاعلية جزيئات NF-κB من خلال تقليل التحطيم البروتيزومي لجزيئات IκB مما يؤدي إلى تثبيط عملية النسخ لجزيء Bcl-2 القامع لعملية موت الخلايا المبرمج. نتيجة لذلك، فإن ارتفاع نسبة جزيئات BAX/Bcl-2 توضح حدوث تحفيز لعملية موت الخلايا المبرمج. من جهة أخرى، يقوم الريلوزول بحجب ناقل SLC7AII مما يؤدي إلى تحفيز حالة الإجهاد التأكسدي بواسطة الغلوتامات. أيضاً يُحفز مركب YAP/p73 بواسطة الريلوزول مما يؤدي إلى تحفيز التعبير عن جزيئات BAX. بالإضافة إلى ذلك، يعمل الريلوزول على تثبيط إشارات mGluR1، وبالتالي فإن التعبير عن جزيئات Bcl-2 يقل بشكل غير مباشر. تم تأكيد تحفيز موت الخلايا المبرمج في جميع المجموعات المعالجة من خلال ارتفاع نسبة BAX/Bcl-2 وانخفاض تركيز علامات الالتهاب IL-6 وCOX-2، مع وجود تحفيز موت الخلايا المبرمج بشكل أكثر فاعلية في المجموعة المعالجة بخليط البورتيزوميب والريلوزول. تم تثبيط علامات التجذع السرطاني CD44 و NANOG و SOX2 ومعقدات عوامل النسخ التجذعية السرطانية بواسطة البورتيزوميب والريلوزول عن طريق قمع محاور متعددة مرتبطة بعملية التجذع السرطاني. يمنع البورتيزوميب نشاط جزيء NF-κB وأهدافه مثل IL-6، والذي يرتبط بشكل غير مباشر مع تثبيط التعبير الجيني لعلامات الخلايا الجذعية SOX2 وNANOG وCD44. من ناحية أخرى، يمنع الريلوزول تفاعل ناقل CD44 وSLC7AII، مما يؤدي إلى تحفيز حالة الإجهاد التأكسدي، ويؤدي إلى أكسدة جزيء SOX2 وبالتالي تثبيطه. يمنع الإجهاد التأكسدي وزيادة مركبات الأكسجين التفاعلية التعبير الجيني لعلامات الخلايا الجذعية السرطانية. يحفز البورتيزوميب والريلوزول حالة الإجهاد التأكسدي التي تؤثر سلبًا على التعبير الجيني لعلامات الخلايا الجذعية السرطانية. يقوم البورتيزوميب والريلوزول بتثبيط عملية انتشار الخلايا السرطانية من خلال تثبيط العديد من المحاور المتضمنة في عملية هجرة الخلايا السرطانية وعملية الغزو الخلوي وعملية تكوين الأوعية الدموية. أثبت اختبار حركة الخلايا أن هجرة الخلايا تم منعها بشكل ملحوظ في جميع المجموعات المُعالجة، حيث قام البورتيزوميب والريلوزول بتثبيط مستويات التعبير الجيني لـ VEGF-A على المستوى الجزيئي. بالإضافة إلى ذلك، فإن جزيء VEGF-A هو أحد الأهداف النهائية لإنزيم MMP-9، وبالتالي فإن فعالية MMP-9 قد تم تثبيطها مما أدى إلى منع تكسير ذيل جزيء CD44. توضح هذه النتائج فعالية تركيبة البورتيزوميب والريلوزول في تثبيط انتشار سرطان الثدي. في الختام، سلطت هذه الدراسة الضوء على فعالية البورتيزوميب والريلوزول في استهداف خلايا سرطان الثدي الغدي النقيلي البشري MDA-MB-231. يقوم البورتيزوميب والريلوزول بتثبيط تكاثر ونجاة وتجذع وانتشار خلايا MDA-MB-231 بشكل كبير ويحفز بشكل كبير موت الخلايا المبرمج في جميع المجموعات المُعالجة مع ملاحظة حدوث تعزيز كبير لعملية موت الخلايا المبرمج في مجموعة خليط البورتيزوميب والريلوزول.