الفهرس 
Chapter 1 introduction and aim of the workOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 151 |  |  |
| | | from | 151 | | |
Abstract
يعد سرطان البروستاتا أحد أكثر أنواع السرطان التي يتم تشخيصها في الذكور على مستوى العالم. في المراحل الأولية لسرطان البروستاتا، يتم استخدام علاجات الحرمان من الأندروجين ADT كأسلوب علاجي، ولكن نظرًا للتغاير غير المتجانس لخلايا سرطان البروستاتا، تتطور بعض المستنسخات من خلايا سرطان البروستاتا، والتي قد تحمل طفرات مفيدة بشكل انتقائي تمكنها من مقاومة العلاج الهرموني بواسطة العديد من الآليات الجزيئية والخلوية، وهو ما يفسر تطور خلايا سرطان البروستاتا إلى نوع يطلق عليه السرطان المقاوم للإخصاء CRPCa، وهو نوع يمثل تحديًا معقدًا لأطباء الأورام. وبالتالي توجد ضرورة لتطوير بروتوكول علاجي جديد لمعالجة سرطان البروستاتا المقاوم. يتم تصنيف عقارات البورتيزوميب والريلوزول ضمن العلاجات الموجهة، ويعد البورتيزوميب أول مثبط معتمد للبروتيزوم من قبل إدارة الغذاء والدواء، حيث يتم استخدامه لعلاج الورم النِّقوي المتعدد، في حين يستخدم الريلوزول لعلاج التصلب الجانبي الضموري عبر عدة آليات تتضمن تثبيط إفراز الجلوتاميت. علاوة على ذلك، يمنع البورتيزوميب التحطيم البروتيزومي لجزيئات IκB عن طريق تثبيط البروتيزوم، مما يؤدي إلى تثبيط نشاط جزي NF-κB، ومن ناحية أخرى، يقوم الريلوزول بتثبيط تدفق الجلوتاميت عبر ناقل SLC7A11، مما يؤدي إلى قمع إشارات المستقبل mGluR1، واستنادًا إلى الأدلة السابقة، من المنطقي أن الاستهداف المشترك لجزيء NF-κB ومستقبلmGluR1 يمكن أن يوفر نهجًا علاجيًا محتملاً لسرطان البروستاتا. تهدف هذه الدراسة إلى دراسة تأثير مثبط إفراز الجلوتاميت الريلوزول ومثبط البروتيزوم البورتيزوميب، إما بمفردهما أو معًا، على تكاثر خلايا سرطان البروستاتا وعملية موت الخلايا المبرمج وانتشار الخلايا ومستوى الالتهاب والتجذع لخلايا سرطان البروستاتا باستخدام نموذج مخبري لخط خلايا سرطان البروستاتا PC-3 المنتشر والمستقل عن الأندروجين. ولتحقيق ذلك، تم تقسيم خلايا سرطان البروستاتا PC-3 إلى أربع مجموعات على النحو التالي : المجموعة الأولى : المجموعة الضابطة (خلايا PC-3 بدون علاج). المجموعة الثانية : خلايا PC-3 معالجة بال البورتيزوميب. المجموعة الثالثة : خلايا PC-3 معالجة الريلوزول. المجموعة الرابعة : خلايا PC-3 معالجة بخليط البورتيزوميب والريلوزول. تم تقييم التأثير المضاد للتكاثر والسمية الخلوية للريلوزول والبورتيزوميب على خلايا PC-3 باستخدام فحص MTT، وتم استخدام النتائج لحساب تركيز العقارات الموافق للتثبيط النصفي IC50، والتي تم تحديدها على أنها 98.91 nM للبورتيزوميب 68,187 nM للريلوزول. بعد ذلك، تم اجراء فحص MTT بناء على نموذج Chou-Talalay (CompuSyn Software)، بهدف تحديد الجرعة التآزرية synergistic dose لعقارات الريلوزول والبورتيزوميب. وأظهرت النتائج أن التأثير المثبط للبورتيزوميب والريلوزول على تكاثر خلايا PC-3 قد ازداد بشكل ملحوظ بنمط يعتمد على الجرعة. بالإضافة لذلك، أظهر فحص تكوين المستعمرات colony formation assay حدوث انخفاض كبير في نمو وبقاء خلايا PC-3 في كل المجموعات المعالجة مع ملاحظة وجود تأثير بارز في مجموعات البورتيزوميب وخليط البورتيزوميب والريلوزول. استنادًا إلى النتائج التي توصلنا إليها والدراسات السابقة ذات الصلة، اتضح وجود تواصل متبادل محتمل بين جزيء NF-κB ومستقبل mGluR1. يتم تحفيز تحويل الجلوتامين إلى الجلوتاميت من خلال إشارات مستقبل mGluR1 وإنزيم Rho GTPase الذي يقوم بتحفيز إنزيمات GLS1/2 بناء على نمط يعتمد على جزيء NF-κB. بالإضافة لذلك، تفترض بعض الدراسات أن إشارات مستقبل mGluR1 تقوم بتحفيز جزيء NF-κB، لكن الآلية مجهولة حتى الآن. تؤدي عقارات البورتيزوميب والريلوزول إلى زيادة مركبات الأكسجين التفاعلية وبالتالي تزيد نسبة الإجهاد التأكسدي داخل الخلايا مما يؤدي إلى حدوث تكسير في الحمض النووي وتثبيط التكاثر وبالتالي تحفيز عملية موت الخلايا المبرمج. وتم استخدام تحليل لطخة ويسترن western blot analysis لتقييم مستوى تعبير بروتينات NF-κB وmGluR1، والتي تمثل أهداف لعقارات البورتيزوميب والريلوزول. يقوم البورتيزوميب بتثبيط البروتيزوم مما يؤدي إلى تراكم جزيئات BAX المحفزة لعملية موت الخلايا المبرمج. علاوة على ذلك، يقوم البورتيزوميب بتثبيط نشاط جزيئات NF-κB من خلال تثبيط التحطيم البروتيزومي لجزيئات IκB وp65 مما يؤدي إلى تثبيط عملية النسخ لجزيء Bcl-2 القامع لعملية موت الخلايا المبرمج. وبالتالي، فإن زيادة نسبة جزيئات BAX/Bcl-2 توضح حدوث تحفيز لعملية موت الخلايا المبرمج. على الجانب المقابل، ينتج عن الريلوزول تحفيز الإجهاد التأكسدي المحفز بالجلوتاميت من خلال تثبيط الناقل SLC7A11. يقوم الريلوزول بتحفيز تكوين معقد YES-associated protein/p73، مما يؤدي إلى تحفيز التعبير الجيني لجزيء BAX المحفز لعملية موت الخلايا المبرمج. بالإضافة إلى ذلك، يقوم الريلوزول بتثبيط إشارات مستقبل mGluR1 وبالتالي يؤدي بطريقة غير مباشرة إلى تثبيط التعبير الجيني لجزيء Bcl-2 القامع لعملية موت الخلايا المبرمج. وتم التحقق من حدوث عملية موت الخلايا المبرمج من خلال ارتفاع نسبة BAX/Bcl-2 ونقصان تركيز علامات الالتهابات IL-6 وTNF-α في جميع المجموعات المعالجة مع ملاحظة حدوث تحفيز بارز لعملية موت الخلايا المبرمج في مجموعة خليط البورتيزوميب والريلوزول. تؤدي عقارات البورتيزوميب والريلوزول إلى تثبيط علامات التجذع السرطاني مثل CD44 وNANOG وSox2 من خلال قمع العديد من المحاور المتداخلة مع عملية التجذع السرطاني. بالإضافة لذلك، لوحظ حدوث نقصان في التعبير الجيني لجزيء MDR-1 في جميع المجموعات المعالجة. ولوحظ أيضًا حدوث تثبيط في مستويات التعبير الجيني لجزيئات NANOG وSox2 بنمط يعتمد على الزمن في مجموعات البورتيزوميب والريلوزول، بينما في مجموعة خليط البورتيزوميب والريلوزول، فقد حدث انخفاض كبير في مستويات التعبير الجيني لجزيئات NANOG وSox2 بعد 6 أو 12 ساعة من العلاج، وهو ما يبرز فعالية خليط البورتيزوميب والريلوزول في تثبيط عملية التجذع السرطاني لخلايا سرطان البروستاتا. علاوة على ذلك، فإن تثبيط أهداف جزيء NF-κB مثل IL-6 يتوسط بشكل غير مباشر تقليل التعبير الجيني لجزيئات NANOG وSox2 في جميع المجموعات المعالجة. تقوم عقارات البورتيزوميب والريلوزول بزيادة نسبة الإجهاد التأكسدي والتي تؤثر سلبيًا على التعبير الجيني لعلامات التجذع السرطاني. تقوم عقارات البورتيزوميب والريلوزول بتثبيط عملية انتشار الخلايا السرطانية من خلال تثبيط العديد من المحاور المتضمنة في عملية هجرة الخلايا السرطانية وعملية الغزو الخلوي وعملية تكوين الأوعية الدموية. وأشار فحص حركة الخلايا cell motility assay إلى حدوث قمع لعملية هجرة الخلايا في جميع المجموعات المعالجة. على المستوى الجزيئي، تقوم عقارات البورتيزوميب والريلوزول بتثبيط مستويات التعبير الجيني لجزيئات CD44 وVEGF-A. بالإضافة لذلك، يؤدي تثبيط جزيء TNF-α إلى حدوث انخفاض في التعبير الجيني والنشاط لجزيئات MMP-9 وCD44. بالتالي تشير هذه النتائج إلى فاعلية عقارات البورتيزوميب والريلوزول في تثبيط عملية انتشار خلايا سرطان البروستاتا. في الختام، تسلط هذه الدراسة الضوء على فاعلية عقارات البورتيزوميب والريلوزول في استهداف خلايا سرطان البروستاتا PC-3 المنتشرة والمستقلة عن الأندروجين. واتضح كذلك فاعلية عقارات البورتيزوميب والريلوزول في تثبيط تكاثر ونجاة وتجذع وانتشار خلايا PC-3، واتضح أيضًا فاعلية عقارات البورتيزوميب والريلوزول في تحفيز عملية موت الخلايا المبرمج في جميع المجموعات المعالجة مع ملاحظة حدوث تحفيز بارز لعملية موت الخلايا المبرمج في مجموعة خليط البورتيزوميب والريلوزول.